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正相色譜和反相色譜究竟有何不同?答案其實很簡單

更新時間:2021-10-15

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高效液相色譜(HPLC)法選擇性高、靈敏度高、分析速度快,是現(xiàn)代分離測試的重要手段。色譜柱作為高效液相分離系統(tǒng)的中的重要環(huán)節(jié),色譜柱的類型決定了色譜系統(tǒng)的性質(zhì),色譜柱的粒徑和長度影響了分析時間和分析效率。

氨基柱、苯基柱、氰基柱等正相色譜柱和C18、C8等反相色譜柱是色譜分析工作中常見的兩類色譜柱。正相色譜和反相色譜的區(qū)別本質(zhì)上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強(qiáng),洗脫順序由弱到強(qiáng);反相色譜柱填料極性弱,洗脫順序由強(qiáng)到弱。

正相色譜:采用極性鍵合固定相,硅膠表面鍵合的是極性的有機(jī)基團(tuán),鍵合相的名稱由鍵合上去的基團(tuán)而定。最流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑,如烴類溶劑,或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等),以調(diào)節(jié)流動相的洗脫強(qiáng)度。分離機(jī)制屬于分配色譜:組分的分配比K值,隨其極性的增加而增大,但隨流動相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大(或濃度增大)而降低。同時,極性鍵合相的極性越大,組分的保留值越大。該法主要用于分離異構(gòu)體,極性不同的化合物,特別是用來分離不同類型的化合物。分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。


反相色譜:用的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
 
 

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